Рубрики

» » Імунохроматографічний аналіз: сутність методу

Імунохроматографічний аналіз: сутність методу

Що являє собою імунохроматографічний аналізу (ІХА)? Розберемося докладніше в цьому питанні. ІХА – імунохімічний спосіб аналізу, який заснований на методі тонкошарової хроматографії. Він включає реакцію між відповідним антитілом і антигеном в біологічних матеріалах. Здійснюється за допомогою особливих тест-смужок, тест-касет або панелей. ІХА – це експрес-тест.

Сутність даного методу дослідження

Дія його ґрунтується на тому, що при зануренні в біологічну рідину (або інший рідкий зразок) тесту вона починає рухатися вздовж смужки за методом тонкошарової хроматографії. Рухаються разом з нею нанесені на неї специфічні мічені антитіла, які зв'язуються афінно з аналізованим компонентом.


Імунохроматографічний аналіз: сутність методу
Розрізняються два формати аналізу: прямий і конкурентний метод.

Прямий метод

У форматі сэндвичного (прямого) імунохроматографічного аналізу крові використовується кон'югат антитіла-мітки, який наноситься для кон'югату на мембрану. Іммобілізовані антитіла на смужці, що володіють конкретним аналитом, на контрольної лінії – антитіла антивидовые, специфічні до антитілам первинним. При внесенні зразка, в якому міститься кон'югат (шукане речовина), на мембрану, зв'язується шуканий компонент з кон'югатом Ат-мітки. Після цього сформований імунний комплекс проникає в тестову зону, де відбувається зв'язок зі специфічними антитілами, і утворюється «сендвіч» Ат - Аг-Ат-мітка. Потім надмірна кількість не зв'язався кон'югату з'єднується на контрольної лінії з антивидовыми антитілами. Якщо на тест-смужці з'являються дві лінії, то результат тесту позитивний. Якщо аналіт відсутній у зразку, то зв'язується з кон'югат антивидовыми антитілами лише на контрольної лінії, і утвориться одна лінія.


Імунохроматографічний аналіз: сутність методу
Прямий ІХА застосовується для визначення збудників інфекційних патологій, вірусів – високомолекулярних сполук, включаючи різні гормони, ВІЛ.

Конкурентний метод дослідження

Спосіб конкурентного імунохроматографічного аналізу застосовується для встановлення низькомолекулярних сполук. Заснований він на конкуренції іммобілізованого кон'югату аналіт і аналіту: носій-білок за обмежену кількість центрів зв'язування периферичних антитіл, які містяться в конъюгате Ат-мітка. Коли наноситься зразок, що містить аналіт, то останній зв'язується на мембрані з кон'югатом з кон'югатом Ат-мітка. Иммунокомплекс надалі проходить через тестову зону, в якій мобілізують кон'югат аналіт, тобто білок-носій. З цим кон'югатом не може зв'язатися иммунокомплекс з-за стеріческіх складнощів: низькомолекулярні сполуки найчастіше володіють однією антигенною детермінантою, таким чином, у імуноглобулінів є один центр зв'язку з антигеном, який вже зайнятий до цього аналитом. Імунний комплекс згодом зв'язується антивидовыми імуноглобулінами, які знаходяться на контрольної лінії. Якщо у тестовій області відсутня забарвлена смуга і є забарвлення в контрольній зоні, це говорить про те, що зміст визначуваного компонента в досліджуваному зразку вище порогового значення для такого тесту. Якщо в аналите відсутня аналізоване речовина у зразку, то відбувається зв'язок кон'югату Ат-мітка з кон'югатом Аг: носій-білок, іммобілізований в області тестової лінії. Ат-мітка вільний кон'югат потрапляє у сферу контрольної лінії, де зв'язується з антивидовыми антитілами. Якщо є дві пофарбовані лінії (контрольна і дослідна), то можна говорити про негативний результат тесту.
Імунохроматографічний аналіз: сутність методу
Метод конкурентного ІХА застосовується для визначення низькомолекулярних сполук, включаючи тканинні екстракти. Перевага такого способу – легкість і швидкість використання, можливість застосування неприборных методів ІХА з оцінкою результату візуально. Не потрібно додаткове обладнання, та аналіз може провести людина без медичної освіти, у будь-який час.

Які застосовуються мітки в ІХА?

У иммунохроматографическом аналізі в якості міток застосовуються різні частинки речовини.
  • Барвники (частки фарбованого латексу, або наночастинки вуглецю, або колоїдного золота). Такий варіант дозволяє візуально відстежувати результат або визначити колориметричним приладом. Застосування фарбувальних міток, які приєднуються до носія, дозволяє робити мультианализ, де різнокольорові лінії відповідають різним аналитам. Використовується міткою найчастіше виступають наночастинки золота колоїдного.
  • Імунохроматографічний аналіз: сутність методу
  • Пов'язані ковалентно з латексними частками біолюмінесцентні, фосфоресцентные і флуоресцентні мітки. Застосовуються лише у приладових способи ІХА, в яких реєструється результат особливим рідером. Найбільш поширеними є флуоресцентні мітки.
  • Парамагнітні мітки, закріплені на латексних частинках. Метод застосовується в ІХА з використанням приладів, які реєструють силу магнітного поля.
  • Ліпосоми, що використовуються в якості носіїв різних міток (електроактивних, ферментативних, флуоресцентних, фарбувальних і т. д.) Це новий напрямок серед різновидів аналізу.
  • Ферментні мітки, застосовуються за принципом ІФА. Реєстрація реакції проводиться за допомогою фарбування субстратів. У підсумку виходить візуальний результат, або зчитується рідером.
  • Переваги даного методу дослідження

    Головними перевагами застосування методу імунохроматографічного аналізу стають:
  • Зручність і простота – дозволяє отримати результат (первинне уявлення і аналіз причини хвороби) без спеціальних навичок і устаткування.
  • Надійність – достовірність тестів досягає 998 %, кожен тест при цьому має внутрішній вбудований контроль.
  • Анонімність – це особливо важливо при визначенні хвороб, що передаються статевим шляхом, інших інфекційних хвороб, а також встановлення вживання наркотичних речовин.
  • Економічність – придбати тест може кожен, економиться час на проведення аналізу.
  • Незалежність – не потребує попередньої консультації та рецепті лікаря.
  • Імунохроматографічний аналіз: сутність методу

    Тест на наркотики як проводиться: особливості і недоліки ІХА-методу

    Найпопулярнішою послугою стає аналіз сечі на наркотики за допомогою імунохроматографічного методу аналізу. Це дозволяє досліджувати сечу на 14 видів наркоречовин.

    Імунохроматографічний аналіз: сутність методу
    Імунохроматографічний аналіз на наркотики також вважається експрес-методом діагностики. Результат тесту можна дізнатися через 15 хвилин. Для проведення даного дослідження використовують особливі тест-смужки, які просочені речовинами-індикаторами. Якщо в сечі є сліди наркотичної речовини, колір смужки змінюється. Основний недолік такого аналізу – неможливість визначити, яка концентрація речовини і ступінь наркотичного сп'яніння, таким чином, результати імунохроматографічного аналізу в якості доказу в суді використовувати не вийде.

    Який результат такого аналізу?

    Якщо на індикаторах з'явилися дві рожеві смуги, то робиться висновок, що в сечі не міститься наркотик, або ж його концентрація недостатня для визначення іммунохроматографіческіх методом. При виникненні однієї рожевої смуги можна говорити про наявність наркотичного речовини: марихуани, похідних эфедрона, опіатів, похідних барбітурової кислоти, амфетамінів, кокаїну, фенциклидина, бензодіазепінів, екстазі.
    Імунохроматографічний аналіз: сутність методу

    Які можна зробити висновки?

    Імунохроматографічний аналіз (експрес-тест), є ефективним засобом діагностики, він дозволяє візуально протягом декількох хвилин виявити і оцінити концентрацію антигенів, гормонів, антитіл та інших діагностично важливих компонентів в людському організмі. Експрес-тести мають високу ступінь точності і чутливості, виявляється більше ста видів хвороб, а також весь спектр наркотичних речовин, та достовірність аналізу дуже висока.
    12